Nell'apertura del film, mentre un disco volante parte da un pianeta, una creatura aliena umanoide ingerisce un misterioso liquido nero in costante mutazione, e a causa di questo inizia a disgregarsi cadendo in una cascata e innescando una reazione biogenetica con il proprio DNA.
Scozia, anno 2089. La coppia di archeologi Elizabeth Shaw (Noomi Rapace) e Charlie Holloway (Logan Marshall-Green) scopre sulla parete di una grotta una mappa stellare dipinta, pari a quella di molte altre culture antiche non collegate. I due interpretano questa mappa come un invito da precursori dell'umanità, gli "Ingegneri". Peter Weyland (Guy Pearce), l'anziano presidente della Weyland Corporation, finanzia il progetto per la costruzione della nave scientifica Prometheus, creata per raggiungere l'unico luogo nel quale la disposizione dei pianeti è uguale alla mappa ritrovata. Nel 2093 si raggiunge così la luna LV-223. L'equipaggio della nave, che viaggiava in ibernazione, viene svegliato poco prima dell'approccio al satellite dall'androide David (Michael Fassbender). La Prometheus atterra nei pressi di una grande struttura artificiale, che la squadra si prepara ad esplorare. All'equipaggio è affidato l'incarico di trovare tracce degli Ingegneri sul pianeta. Prima dell'inizio della spedizione, Meredith Vickers (Charlize Theron), autorità di controllo della missione, ordina all'equipaggio di non prendere contatto con esseri alieni nel caso si fossero trovati.
All'interno della struttura aliena, dove l'aria diventa respirabile, il gruppo trova il cadavere di una creatura aliena, decapitata dalla chiusura di una porta. Quando riesce ad aprirla, trova una sala piena di cilindri di pietra, simili a vasi, pieni di un liquido viscoso nero, posti di fronte ad un gigantesco monolite la cui forma ricorda una testa umana. Trovano più avanti altri cadaveri degli imponenti esseri, ipotizzando che la loro razza sia estinta. All'insaputa dell'equipaggio, David prende uno dei cilindri, mentre dagli altri inizia a fuoriuscire la sostanza che contengono. Una forte tempesta in arrivo costringe la squadra a ritornare tempestivamente sul Prometheus, lasciando però i membri Millburn (Rafe Spall) e Fifield (Sean Harris) all'interno della struttura. Nei laboratori della nave, si scopre che il DNA degli Ingegneri coincide con quello degli esseri umani. Intanto, David analizza il cilindro recuperato, prendendo un campione del liquido nero, che farà ingerire ad Holloway a sua insaputa. Più tardi, quest'ultimo ha un rapporto sessuale con Shaw.
Nel frattempo, all'interno del mausoleo alieno, una piccola creatura simile a un serpente entra dentro Millburn e spruzza un acido sul volto di Fifield, uccidendo quindi entrambi. Più tardi, il gruppo ritorna nella struttura aliena e scopre il cadavere di Millburn. David si separa dal gruppo e scopre in una specie di sala di controllo un ologramma di una mappa stellare che evidenzia la Terra ed un Ingegnere vivo in ibernazione. Intanto l'ingestione del liquido nero causa un'infezione a Holloway, che inizia a sentirsi male. Holloway, aiutato da Shaw, torna di corsa alla nave chiedendo aiuto, ma Vickers non lo lascia entrare. Holloway, sapendo che la propria condizione potrebbe compromettere l'intero equipaggio si fa bruciare con un lanciafiamme. Dopo questo Shaw sviene per la scena.
Una scansione medica rivela che Shaw, pur essendo sterile, porta in grembo una creatura non umana. Orripilata, Shaw scappa dai medici e decide di usare un tavolo chirurgico automatizzato nella suite di Vickers per estrarre il feto, che si rivela essere un strano organismo simile a un calamaro. Camminando in stato confusionale per la nave, scopre che Weyland ha viaggiato nel Prometheus di nascosto e spiega a Shaw che prima di morire avrebbe cercato di parlare con gli Ingegneri per ottenere la vita eterna. Si viene a conoscenza inoltre che Vickers è figlia dell'uomo.
L'hangar principale viene attaccato da un Fifield sfigurato e mutato dal liquido nero, il quale l'ha reso estremamente agile, forte e resistente ai proiettili; egli uccide diversi membri dell'equipaggio prima di soccombere e venire bruciato. Janek (Idris Elba), il capitano del Prometheus, ipotizza che l'edificio alieno sia stata una base militare degli Ingegneri, sede di esperimenti sul liquido nero, del quale probabilmente persero il controllo. Poco dopo Janek scopre anche un'altra struttura sotterranea, sottostante la base degli Ingegneri, e comprende che si tratta di un'astronave, supponendo che ce ne siano molte altre. Intanto Weyland e il suo team ritornano nel mausoleo alieno trovato da David e risvegliano l'Ingegnere. Su ordine di Weyland, l'androide tenta di comunicare con l'Ingegnere, che per risposta lo decapita, uccidendo Weyland e la sua squadra. Shaw riesce a fuggire dall'astronave aliena, mentre l'Ingegnere la riattiva e si prepara al decollo.
Shaw avverte Janek che l'Ingegnere intende dirigersi verso la Terra per sterminare il genere umano; per fermarlo, il capitano e i due navigatori decidono di sacrificarsi facendo schiantare il Prometheus contro l'astronave aliena, mentre Vickers abbandona la nave con una scialuppa di salvataggio.
La nave danneggiata dell'Ingegnere si schianta al suolo, schiacciando Vickers. Shaw si dirige nella suite eiettabile di Vickers per rifornirsi di ossigeno. Immediatamente riceve una comunicazione da David, fisicamente danneggiato ma ancora funzionante. Egli riferisce che l'Ingegnere è sopravvissuto allo schianto, e sta dirigendosi verso la donna per ucciderla. Questo infatti forza l'entrata della navicella e l'attacca. Per difendersi, Shaw libera dalla camera a tenuta stagna in cui era rimasto il feto alieno, divenuto gigante, che immobilizza l'Ingegnere coi suoi tentacoli e gli si attacca al volto. Shaw recupera i pezzi ancora operativi di David sulla nave aliena caduta e con il suo aiuto parte con un'altra astronave aliena con l'obiettivo di raggiungere il pianeta nativo degli Ingegneri e chiedere loro perché vogliono annientare l'umanità.
Nel finale, all'interno della suite del Prometheus, il feto appare morto mentre dal petto dell'Ingegnere esce uno xenomorfo adattato alla struttura fisica dell'ospite, più massiccia rispetto a quella umana, con l'estremità posteriore della testa a punta e la bocca interna più grande.
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